1. 2011年春季学期 电泳分析 血清蛋白电泳 血清免疫固定电泳 何晓娟 南方医科大学生物化学与分子生物学实验教学中心 生物化学与分子生物学实验教学中心 2011年春季学期 19/4 电泳技术 电泳：溶液中带电粒子的定向现象电场中的运动称为电泳 ( )。 电泳技术是利用带电粒子在电场作用下定向运动的特点来分离、纯化和测量混合物组分的技术。生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4电泳的分类按分离目的：分析型电泳、制备型电泳 按电场强度：常压电泳、高压电泳 按电泳介质：自由电泳、区带电泳 区带电泳（按支持介质）：淀粉凝胶电泳 滤纸电泳
2.醋酸纤维素膜电泳、琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳，按支持介质形式分：水平电泳、垂直电泳，按缓冲液pH值分：连续pH和间断pH电泳，生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4临床电泳项目 琼脂糖电泳临床电泳项目：血清蛋白电泳、免疫固定电泳、尿蛋白电泳、同工酶电泳、脑脊液寡克隆电泳、Benny蛋白电泳、脂蛋白电泳、生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季第 19/4 学期 血清蛋白电泳 (SPE) 检测蛋白质水平病理变化的方法和手段。 主要用于肝病、肾病、自身免疫性疾病、血液病、多发性骨髓瘤等蛋白质疾病的诊断。电泳图谱不能直接诊断临床疾病，但
3.通过特征图谱可以对某些疾病进行分类，评估疾病的进程和活动性，评估治疗方案的有效性。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 血清免疫固定电泳（IFE）是一个包括琼脂糖凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作。 它是免疫沉淀反应的混合技术。 。 优点：将血清蛋白电泳、高分辨率、抗原抗体特异性免疫反应等有机结合起来，对蛋白质进行分离、整形，直观观察Ig各种重链、轻链的类型。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 血清蛋白醋酸纤维素膜电泳结果 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 等电点、平均相对分子质量、
4、白蛋白 A 的正常含量 1 2 pI 相对分子量（104）含量（%） 4.88 6.9 5772 5.06 20 25 5.06 30 49 5.12 915 6.212 6.857.3 15.630 1220 球蛋白生物化学与分子生物学实验教学中心 2011 年春季学期19 /4 正常血清蛋白电泳图谱 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 血清蛋白电泳区 白蛋白区：主要由白蛋白组成。 1-球蛋白区：1-抗胰蛋白酶、1-脂蛋白、1-酸性糖蛋白、甲状腺结合球蛋白、凝血酶原等。 2-球蛋白区：2-巨球蛋白、触珠蛋白、铜蓝蛋白、2-脂蛋白、红细胞
5.细胞生成素等。 -球蛋白区：主要含有铁蛋白、β-脂蛋白、补体C3、C4、2-微球蛋白等。 -球蛋白区含有IgG、M、A、D、E免疫球蛋白。生物化学与分子生物学实验教学中心 2011 年春季学期 19/4 正常参考值 A: 32 50g/L (60.3 71.4%) 1: 10 40g/L (1.4 2.9%) 2: 6 10g/L (7.2 11.3%): 6 13g/L ( 8.1 12.7%): 7 15g/L (8.7 16.0%) 生物化学与分子生物学实验教学中心 2011 年春季学期 19/4 生物化学与分子生物学实验教学中心 2011 年春季学期 19/ 4 生物化学与分子生物学
六、实验教学中心2011年春季学期19/4 临床意义 1、M蛋白（免疫球蛋白异常）血症：β球蛋白区、β球蛋白区或两者之间出现细带和粗带。 有时它是波状的，在光密度计扫描中显示为尖锐的 M 蛋白峰带。 2.蛋白质缺乏 3.肾脏疾病 4.急慢性炎症 5.肝脏疾病：肝硬化时出现“-桥”。 原发性肝癌在Alb和1-球蛋白之间有一条小带，称为甲胎蛋白带。 。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 血清蛋白电泳异常规律及临床分析 急性炎症与应激型：机体受到各种损伤或炎症刺激时的病理现象。主要特征：Alb降低或正常， 1、2-球蛋白增加，β-球蛋白
7、增加不明显。 当炎症变成慢性时，它会显着增加。 病理生理：Alb降低主要是由于蛋白水解过度，1、2-球蛋白增加与急性期反应蛋白1糖蛋白增加有关，区带减少是由于转铁蛋白分解代谢增加所致。 由于新生儿触珠蛋白合成不完全，当有炎性病变时，2区不明显增大，而1区可明显增大。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 肾病类型：低白蛋白血症、蛋白尿、高脂血症、肾小球损伤引起的全身性水肿。 主要特征：Alb明显降低，1-球蛋白轻度升高，2-球蛋白明显升高，β-球蛋白降低，正常或升高。小儿类脂性肾病，β-球蛋白可能降低，有时为零； 成人肾病
8. β-球蛋白通常在综合症中升高，特别是在狼疮肾病中。 病理生理学：白蛋白降低是由于肾小球滤过增加所致。 1-球蛋白的增加，主要是小分子量1-糖蛋白的增加，可能是为了补偿Alb降低引起的低渗透压。 虽然1-糖蛋白也大量随尿液流失，但体内合成的量超过排出的量，因此仍然可以增加身高。 2-球蛋白的显着增加是由于2-球蛋白和低密度脂蛋白的相对增加。 球蛋白的减少主要是由于小分子量转铁蛋白排泄到尿液中引起的。 球蛋白减少主要是漏入尿液和体内过度分解造成的，而慢性肾炎、狼疮性肾炎等球蛋白增加可能是由于免疫刺激，使IgG增加所致。生物化学与分子生物学实验教学中心 2011 年春季学期 19/4 扩散
9、慢性肝损伤型主要特点：Alb明显降低，轻者1-球蛋白可轻度升高。 然而，当肝细胞损伤严重时，1、2和球蛋白通常会减少。 在胆汁淤积性肝炎中，β-球蛋白可能升高，β-球蛋白可能轻度或中度升高。 病理生理学：虽然Alb的合成减少，但其半衰期较长。 其浓度的降低大多发生在发病十天后。 当病情恢复后，就会恢复正常。 如果是慢性的话，会逐渐减少。 减少的程度与肝炎的严重程度一致。 在肝炎早期，β1-球蛋白作为急性时相反应物质，常升高，但肝损害严重时则降低。 在致命性肝衰竭中，1-球蛋白可降至非常低的水平。 2-球蛋白的减少可能是由于触珠蛋白合成的减少，但在胆汁淤积性肝炎中，2-球蛋白位点可能是由于脂蛋白的增加而可见。
10. 增加。 当发生急性肝坏死时，2-球蛋白显着减少。 肝炎早期球蛋白几乎没有变化，肝细胞损伤严重时其合成减少。 几乎所有肝脏疾病中，球蛋白水平都会因合成过度而升高，升高的幅度与疾病的严重程度一致。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 肝硬化主要特点：Alb不同程度降低，1、2、球蛋白正常或降低，-G明显升高且宽度增大，-桥看得到 。 病理生理学：肝细胞损伤导致白蛋白显着下降。 -桥的出现与血清免疫球蛋白，特别是IgA、IgM、IgG同时升高有关。 其中，IgA影响较大。 当IgA和IgM在 之间游动时，使区域与区域合并形成——
11. 桥梁。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 原发性肝癌的主要特征：Alb和1-球蛋白之间出现一条小带血清蛋白电泳，称为甲胎蛋白带。 病理生理学； 肝癌时，血清中甲胎蛋白的浓度是正常人的几十甚至上万倍。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 宽宽超G综合征（多株高免疫球蛋白综合征） 主要特点：-G宽度明显增大，呈现宽峰。 病理生理学：由于大量免疫球蛋白的合成，多种浆细胞以大致相同的速度增殖。 它们是多克隆的。 如果合并急性感染，1和2的水平会明显升高。生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 M蛋白血症（单克隆免疫球蛋白异常）主
12、主要特征：M蛋白又称异常免疫球蛋白。 其能带宽度大致等于或窄于Alb带，且常分布在2至慢G部分。 病理生理学：M蛋白是某种细胞系分泌的大量具有相同结构和电泳迁移率的蛋白质。 在多发性骨髓瘤和原发性巨球蛋白血症中，除M蛋白外的其他免疫球蛋白显着减少。 这可能是由于M蛋白大量消耗氨基酸，导致其他免疫球蛋白合成相对不足，M蛋白代谢亢进。 ，其他免疫球蛋白的分解代谢也增加，因此含量减少。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 二白蛋白血症型主要特征：白蛋白区有两个区域，光密度扫描出现双峰，呈剪刀状。 原因：二白蛋白血症分型分为两种：持久型和瞬态型。
13、持续型主要是家族性血清蛋白异常性疾病，极为罕见，呈不完全常染色体显性遗传； 而一过性型主要是指肾功能不全患者在治疗过程中使用大剂量内酰胺类抗生素。 ，可以形成快速移动的白蛋白成分，如果中断治疗，该成分会逐渐消失。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 先天性白蛋白缺乏症类型： 主要特点：由于血清白蛋白明显减少，血清总蛋白也减少，球蛋白1、2明显增加，球蛋白也增加。 在严重的无白蛋白血症情况下，白蛋白有时会降至零。 病因：本病是一种非常罕见的先天性疾病，可能是由于遗传缺陷或肝细胞白蛋白合成功能显着低下所致。 尽管本病患者的白蛋白含量仅为正常人的0.05%，但血浆胶体渗透压仍为正常人的1/2左右。 这是由于球蛋白的代偿性增加所致。 例如，转铁蛋白是正常的。 是正常人的20-3倍，1-巨球蛋白是正常人的3.5倍，脂蛋白是3倍，IgM是3倍。 此时血清白蛋白的半衰期也显着延长，可达到正常人的3-4倍。 对维持血浆胶体渗透压有一定作用。 生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期19/4 蛋白质电泳几种疾病的变化 疾病名称 Alb 1 2 肾病 肝硬化 原发性肝癌 多发性骨髓瘤 慢性炎症 无丙种球蛋白血症 双白蛋白血症 AFP -生物化学与分子生物学实验教学中心2011年春季学期 19/4 2011年春季学期
