琼脂糖凝胶电泳原理详细介绍

琼脂糖凝胶具有网状结构，物质分子通过时会遇到阻力。 高分子物质在波动时会遇到很大的阻力。 因此，在凝胶电泳中，带电粒子的分离不仅取决于净电荷的性质和数量电泳原理，还取决于分子的大小，这大大提高了分辨能力。 但由于其孔径与蛋白质相比太大，其分子筛效应对于大多数蛋白质来说微不足道，目前广泛应用于核酸的研究中。

根据 pH 值的不同，蛋白质和核酸会带有不同的电荷，并且会在电场中受到不同的力，因此它们以不同的速度运行。 根据这个原理，就可以将它们分开。 电泳缓冲液的pH值在6到9之间，离子强度在0.02到0.05之间最佳。 1% 琼脂糖通常用作电泳支持物。 琼脂糖凝胶可以区分相差约 100 bp 的 DNA 片段。 虽然其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶，但其制备容易，分离范围宽。 普通琼脂糖凝胶分离的DNA范围为0.2-20kb。 使用脉冲电泳，可以分离长达 10^7bp 的 DNA 片段。

DNA分子在琼脂糖凝胶中游动时具有电荷效应和分子筛效应。 DNA 分子在高于等电点的 pH 溶液中带负电，并在电场中向正极移动。 由于糖-磷酸骨架的结构重复性质，等量的双链 DNA 具有几乎相等的净电荷，因此它们可以以相同的速率向正极移动。