泳是一种带电粒子在电场作用下向与其电荷相反的电极移动的现象。在一定的pH条件下,每个分子都有特定的电荷(类型和数量)、大小和形状,它们在同一电场中以不同的速度游动一定的时间,并且每个分子都集中在一个特定的位置,形成一个紧密的游泳带。这就是使用电泳技术分离、分析和鉴定带电粒子的基本原理
影响游泳灵活性的因素
1、电场强度:电
场强度是指每厘米的电位降,也称为电位梯度(电位梯度)。电场强度越高,带电粒子游得越快。根据电场强度的不同,电泳可分为:常压(100-500V)电泳。其电场强度为2-10V/cm。分离时间长,从几小时到几十小时不等,适用于蛋白质等大分子物质的分离。
2 解决方案的特性
1) PH值
溶液的pH值决定了带电粒子的解离程度电泳原理,即它们的静电荷量。对于蛋白质,溶液的pH值离等电点越远,颗粒携带的净电荷越多,游泳速度越快。相反,它更慢。因此,在分离某种蛋白质混合物时,应选择适当的pH值,使待分离的各种蛋白质携带的电荷数相差较大
2) 离子强度
溶液的离子强度一般在0.02-0.2之间,电泳比较合适。如果离子强度过高,粒子的速度会降低;如果离子强度过低,则缓冲能力差,游泳率往往受溶液pH值变化的影响。
3) 溶液粘度
游泳动量与溶液的粘度成反比
3. 颗粒性质
粒子直径、形状和静电荷的量对游泳运动有很大影响。一般来说,粒子的静电荷量越大,或直径越小,或形状越接近球体,它在电场中游动的速度就越快。相反,它更慢
4. 电渗电
泳缓冲液相对于固体载体的运动称为电渗。当载体不是绝对惰性物质时,载体上存在的羧基和羟基等离子基团往往会吸附电极溶液中的正离子,使靠近载体的溶液层相对带电并移动到负极,相反,如果载体的离子基团吸附溶液中的负离子, 溶液层将移动到正极。电渗透会影响颗粒的迁移率,因此在电泳过程中最好少进行电渗透5 焦耳热电泳
会产生焦耳热,使介质的粘度降低,分子运动加速,迁移率增加,温度过高而使样品中的生物大分子变性和失活,因此在电泳过程中,为了控制电压或电流,还可以安装冷却和散热装置。
6. 支持
现代电泳
多在固体载体上进行,使样品中的不同组分形成不同的能带,称为带电泳。电泳后,载体可以很容易地进行后处理,如染色。对载体的一般要求是均匀性,吸附和电渗透小,机械性能好,在染色或紫外线下易于检测,因此透明度较好,没有紫外线吸收。常用的载体包括滤纸、醋酸纤维素膜、淀粉凝胶、聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶等不同性能的载体也会影响游游速率,如琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶具有不同大小的筛孔,溶质颗粒在筛孔较大的凝胶中的游速很快,反之亦然。北京
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