Shao Yuhao

前言

多肽药物是大分子蛋白/抗体药物和小分子药物之间的重要药物分子。由于它们具有高生物学活性，高靶向特异性，高选择性以及低毒性和副作用的优势，它们在疾病治疗领域被广泛使用[1]。由于其分子量较大，血浆浓度低和复杂的预处理过程，基于质谱的多肽药物定量一直是一个困难点[2,3]。

甲状旁腺激素（PTH）是由主要甲状旁腺细胞分泌的84种氨基酸组成的肽激素，在维持钙和磷代谢的稳定性方面起着至关重要的作用[4]。 （4117.7Da）是人为重组的人类PTH1-34多肽，是美国食品和药物管理局批准的第一种抗骨质疏松性骨折的骨骼合成药物[5]。

本文将共享基于TSQ三倍四极杆平台和高分辨率质谱平台建立的大分子多肽药物的定量方法，并分别评估TSQ系列和系列的定量分析能力。

序列结构

实验结果

标准的线性和定量下限

我们用包含一定比例的BSA的稀释剂逐步稀释标准标准，并将其配置为一系列浓度的标准产品。建立在三倍四极序列仪器TSQ和TSQ Altis上的分子的SRM方法。在高分辨率仪器平台上，我们使用SIM模式收集数据。所有数据处理均使用软件完成。

结果表明，的下限为28 AMOL，Altis的灵敏度较高，定量的下限为12 AMOL。在高分辨率Q聚焦平台上，的下限为60 AMOL。

标准曲线点和标记值的点之间的差异在15％以内，符合线性要求。表1显示了每个仪器模型的线性范围和定量下限。

表1标准曲线线性范围R2和定量下限

标准LOQ在Altis上的峰值模式和Q焦点如图1所示。每个LOQ下的峰面积很好，检测背景很低，信噪比高，并且矩阵干扰较少。这三种仪器在低浓度点仍显示出良好的稳定性。

图1， loq的峰值图，焦点

（单击查看较大图像）

血浆样品的线性和定量下限

同时，我们还研究了Altis在特殊病例帕替赛血浆样品上的定量能力。血浆样品通过降水法处理，流量如图2所示。

图2血浆样品预处理流

注射结果表明，Altis在表2和图3中显示了具有复杂基质的血浆样品的良好线性，精度和稳定性。在Altis上以24 pg/mL的血浆浓度定量，可以在Altis上实现24 pg/ml-3.1 ng/ml-3.1 ng/ml的张力，仅在Altis上获得24 pg/ml的量。

图3 的血浆标准曲线

表2等离子体软骨回声精度

综上所述

我们分别在TSQ三倍四极序仪器和高分辨率质谱平台上建立了一种针对多肽帕替特特殊情况的定量分析方法。结果表明，由于增强的活性离子控制技术（AIM+），Altis具有良好的定量能力，用于，定量的下限可以分别达到28 AMOL和12 AMOL的上列。同时，对于具有更复杂矩阵的血浆样品，Altis可以达到上柱上30 AMOL的定量下限，显示出强大的抗马trix干扰和定量分析能力。

高分辨率还显示出良好的的定量能力，定量的下限可以分别达到上柱的60 AMOL，并且灵敏度可以与三倍四倍体的敏感性相媲美。作为高分辨率质谱，它具有极高的灵敏度和稳定性，同时具有超高分辨率，并且可以使用定量分析和检测大分子多肽药物。

参考

[1] Lau JL，Dunn M K.：，和[J]。 ＆，2018，26（10）：2700-2707。

[2] Kang L多肽药物，Weng N，Jian W. LC – MS [J]。 ，2019：E4633。

[3] Kay RG，Hands JT，G等。在固体剂量PK研究中，PTH 1-34的LC – MS/MS [J]。 ，2015，7（12）：1435-1445。

[4] E，H。：A [J]。 ，2004，26（6）：841-854。

[5] Berg C，K，P。[J]。 2003。